세포 배양 오염은 세포 배양 실험실에서 쉽게 가장 흔한 문제가 될 수 있으며 때로는 매우 심각한 결과를 초래할 수 있습니다.세포 배양 오염 물질은 배지, 혈청 및 물 불순물, 내독소, 가소제 및 세제와 같은 화학적 오염 물질과 박테리아, 곰팡이, 효모, 바이러스, 마이코플라스마 교차 감염과 같은 생물학적 오염 물질의 두 가지 범주로 나눌 수 있습니다.다른 세포주에 의해 오염됨.오염을 완전히 제거하는 것은 불가능하지만 그 원인을 철저히 이해하고 우수한 무균 기술을 따르면 오염의 빈도와 심각성을 줄일 수 있습니다.
1. 이 섹션에서는 생물학적 오염의 주요 유형에 대해 설명합니다.
세균 오염
곰팡이 및 바이러스 오염
마이코플라스마 오염
효모 오염
1.1세균 오염
박테리아는 유비쿼터스 단세포 미생물의 큰 그룹입니다.그것들은 보통 직경이 몇 미크론에 불과하며 구체에서 막대 및 나선에 이르기까지 다양한 모양으로 나타날 수 있습니다.편재성, 크기 및 빠른 성장 속도로 인해 박테리아는 효모 및 곰팡이와 함께 세포 배양에서 가장 흔한 생물학적 오염 물질입니다.
1.1.1 세균 오염의 검출
박테리아 오염은 감염된 지 며칠 이내에 배양물을 육안으로 검사하여 쉽게 감지할 수 있습니다.
감염된 배양균은 일반적으로 흐릿하게(즉, 혼탁함) 나타나며 때로는 표면에 얇은 필름이 있습니다.
배양 배지의 pH가 갑자기 떨어지는 경우도 자주 발생합니다.
저배율 현미경에서 박테리아는 세포 사이에서 움직이는 작은 과립으로 나타나고 고배율 현미경으로 관찰하면 개별 박테리아의 모양을 확인할 수 있습니다.
1.2곰팡이 및 바이러스 오염
1.2.1 곰팡이 오염
곰팡이는 균사라고 불리는 다세포 필라멘트의 형태로 자라는 진균계의 진핵 미생물입니다.이러한 다세포 필라멘트의 연결 네트워크는 콜로니 또는 균사체라고 하는 유전적으로 동일한 핵을 포함합니다.
효모 오염과 유사하게, 배양물의 pH는 오염의 초기 단계에서 안정적으로 유지되며 배양액이 더 심하게 감염되고 탁해짐에 따라 빠르게 증가합니다.현미경으로 보면 균사체는 일반적으로 실 모양이며 때로는 조밀한 포자 덩어리로 나타납니다.많은 곰팡이의 포자는 휴면기 동안 극도로 가혹하고 열악한 환경에서 생존할 수 있으며 올바른 성장 조건을 만났을 때만 활성화됩니다.
1.2.2 바이러스 오염
바이러스는 번식을 위해 숙주 세포의 기계를 장악하는 미세한 감염원입니다.매우 작은 크기로 인해 배양에서 검출하기 어렵고 세포 배양 실험실에서 사용되는 시약에서 제거하기 어렵습니다.대부분의 바이러스는 숙주에 대한 요구 사항이 매우 엄격하기 때문에 일반적으로 숙주 이외의 종의 세포 배양에 악영향을 미치지 않습니다.
그러나 바이러스에 감염된 세포 배양의 사용은 특히 실험실에서 인간 또는 영장류 세포를 배양하는 경우 실험실 직원의 건강에 심각한 위험을 초래할 수 있습니다.
세포 배양에서 바이러스 감염은 전자현미경, 항체 세트를 사용한 면역염색, ELISA 또는 적절한 바이러스 프라이머를 사용한 PCR로 감지할 수 있습니다.
1.3마이코플라즈마 오염
마이코플라스마는 세포벽이 없는 단순한 박테리아이며 가장 작은 자기 복제 유기체로 생각됩니다.매우 작은 크기(보통 1미크론 미만)로 인해 마이코플라즈마는 매우 높은 밀도에 도달하여 세포 배양을 저하시킬 때까지 감지하기 어렵습니다.그때까지는 일반적으로 명백한 감염 징후가 없습니다.
1.3.1 마이코플라스마 오염 검출
느리게 성장하는 일부 마이코플라즈마는 세포 사멸을 일으키지 않고 배양에서 지속될 수 있지만 배양에서 숙주 세포의 행동과 대사를 변경합니다.
만성 마이코플라스마 감염은 현탁 배양에서 감소된 세포 증식 속도, 감소된 포화 밀도 및 응집을 특징으로 할 수 있습니다.
그러나 마이코플라스마 오염을 검출할 수 있는 신뢰할 수 있는 유일한 방법은 형광 염색(예: Hoechst 33258), ELISA, PCR, 면역 염색, 자가방사선 촬영 또는 미생물 검사를 사용하여 정기적으로 배양을 검사하는 것입니다.
1.4효모 오염
효모는 균류계의 단세포 진핵생물로 크기가 몇 미크론(보통)에서 40미크론(드물게)에 이릅니다.
1.4.1효모 오염 검출
박테리아 오염과 마찬가지로 효모로 오염된 배양물은 특히 오염이 진행된 단계인 경우 흐려질 수 있습니다.효모로 오염된 배양물의 pH는 오염이 더 심해질 때까지 거의 변하지 않으며, 이 단계에서 pH는 일반적으로 증가합니다.현미경에서 효모는 개별 난형 또는 구형 입자로 나타나며 더 작은 입자를 생성할 수 있습니다.
2.교차 감염
미생물 오염만큼 흔하지는 않지만 HeLa 및 기타 빠르게 성장하는 다른 세포주에 의한 많은 세포주의 광범위한 교차 오염은 심각한 결과를 초래하는 명확하게 정의된 문제입니다.평판이 좋은 세포 은행에서 세포주를 얻고 정기적으로 세포주의 특성을 확인하고 우수한 무균 기술을 사용하십시오.이러한 관행은 교차 오염을 방지하는 데 도움이 됩니다.DNA 지문, 핵형 분석 및 동형 분석을 통해 세포 배양에 교차 오염이 있는지 확인할 수 있습니다.
미생물 오염만큼 흔하지는 않지만 HeLa 및 기타 빠르게 성장하는 다른 세포주에 의한 많은 세포주의 광범위한 교차 오염은 심각한 결과를 초래하는 명확하게 정의된 문제입니다.평판이 좋은 세포 은행에서 세포주를 얻고 정기적으로 세포주의 특성을 확인하고 우수한 무균 기술을 사용하십시오.이러한 관행은 교차 오염을 방지하는 데 도움이 됩니다.DNA 지문, 핵형 분석 및 동형 분석을 통해 세포 배양에 교차 오염이 있는지 확인할 수 있습니다.
게시 시간: 2023년 2월 1일